Realizar problemas correspondientes a medios de cultivo (reactivo)
1. Anotar el nombre del medio de cultivo que se nos facilita, con todos los datos visibles en su etiqueta.
R= Base de agar Sangre
Datos:
Formula: Gramos por litro
Agar: 15.0
Cloruro de sodio: 5.0
Infusión de musculo cardiaco: 10.0
Preptona: 10.0
pH 7.3 +- 0.2
Registro No 0123R84 SSA
Contenido neto 450g
Lote No 5957123
Caducidad: 05/febrero/2007
Catálogo No 1031-A
2. Leer cuidadosamente las indicaciones que contiene el bote de medio de cultivo.
3. Rehidratar el contenido en gramos para 1000 ml, del cual deberá ocupar un porcentaje para Rehidratar en 250ml, 175ml y 138ml.
40g/x= 1000ml/250ml x= (40g)(250ml)/1000ml
X=10g
X=(40g)(175ml)/1000ml X= 7g
x= (40g) (138ml)/1000ml
X=5.52gr
4. Las operaciones deben de ser con números básicos como suma, resta, multiplicación, división para poder ejecutar la regla de tres.
Justificación
Realizamos este ejercicio para utilizar los SMD y SA y poder averiguar la cantidad de base agar sangre que ocupariamos de acuerdo al contenido que no siempre seria el mismo
sábado, 9 de mayo de 2009
PROBLEMAS
Cámara de Neubauer
Sangre
Recuento de eritrocitos
Recuento de eritrocitos: ejemplo
Observe que en la grilla de la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes. Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. Ten en cuenta que la grilla central tiene 25 cuadrados de 1mm x 1mm de área y 0.10 mm de profundidad. El factor de dilución es por tanto de 1:200. Convierte el número de glóbulos rojos contados en 5 cuadrados a nº glóbulos rojos/µl. (1 µl (microlitro) = 1 mm3 )
Como se hace?
La imagen de abajo simula el campo que esta viendo al microscopio con un objetivo de 45x. Solo es visible el centro de la grilla. Intenta verificar esto al ir moviendo el campo de derecha-izquierda y de arriba-abajo, como si de una pletina de microscopio se tratase. Cuenta los glóbulos rojos en los cinco cuadrados mencionados anteriormente y determina el recuento de eritrocitos como se ha descrito anteriormente..
Muy importante: Cuando un eritrocito se sitúa en mitad de las líneas superior y/o de la izquierda, entonces es contabilizado. Pero no se contabiliza cuando se sitúa en mitad de las líneas inferior y/o de la derecha..
El rango normal de recuento de glóbulos rojos es el siguiente:
Mujeres: 3.9-5.6 millones/µl
Hombres: 4.5-6.5 millones/µl
Determine el recuento del sujeto cuya muestra aparece en la imagen.
Cual es la solución?
Técnicas de estudio de líneas celulares
TÉCNICAS DE CONTAJE CELULAR
Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables.
Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que empleamos (cámara de Neubauer), hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter.
El principio del contador celular se basa en la medida de los cambios en la resistencia eléctrica que se producen cuando una partícula no conductora en suspensión en un electrolito atraviesa un pequeño orificio. Como se puede ver en el esquema, una pequeña abertura entre los electrodos es la zona sensible a través de la que pasan las partículas que se encuentran en suspensión. Cuando una partícula atraviesa el orificio desplaza su propio volumen de electrolito. El volumen desplazado es medido como un pulso de voltaje. La altura de cada pulso es proporcional al volumen de la partícula. controlando la cantidad de la suspensión que circula a través del orificio es posible contar y medir el tamaño de las partículas. Es posible contar y medir varios miles de partículas por segundo, independientemente de su forma, color y densidad.
En la unidad de Citometría de flujo y Microscopia Confocal de los Servicios Científico-Técnicos de la Universidad de Barcelona se dispone de contadores celulares.
Sin embargo, es posible determinar la densidad celular empleando métodos más sencillos. Nos basta con una cámara de contaje celular, por ej. la cámara de Neubauer, y un microscopio. Una cámara de contaje celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la suspensión a medir. El dispositivo presenta unas señales que determinan un volumen conocido (x microlitros). Al contar bajo el microscopio el número de partículas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de partículas en la suspensión de origen.
La cámara de Neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos lineas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milimetro cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.
Si contamos las cuatro áreas sombreada (L) observando un total de x células entre las cuatro áreas, la concentración en la suspensión celular será :
concentración en la suspensión (células / mL) = 10000 (x/4)
En la imagen puedes observar el aspecto de una de las regiones marcadas como L y que en el microscopio se ven como una cuadrícula de 16 pequeños cuadrados de 0.25 milímetros de lado. Esta imagen ha sido tomada empleando un microscopio invertido de contraste de fases.
Existen numerosos modelos de cámaras de contaje celular adaptadas a su uso en microscopía. En la imagen puedes observar una cámara de Neubauer doble, como las que usas en el laboratorio de prácticas.
Para determinar la viabilidad celular se emplean diferentes métodos. El más común es el de tinción con azul tripán. El azul tripán es un coloide que se introduce en el interior de las células que presentan roturas en la membrana. Así pues las células que aparecen en la imagen, claramente de color azul, son consideradas no viables. Asimilar células blancas, por exclusión, a células viables es un error pues por este método se sobrevalora la viabilidad de las células en la suspensión, determinando como inviables sólo aquellas con la membrana rota. Existen otros métodos de determinación de la viabilidad celular como el más preciso de la tinción con ioduro de propidio
En la red dispones de descripciones detalladas sobre como utilizar un hemocitómetro, como la propuesta por P.J. Hansen, o la detallada descripción que aporta Beckton-Dickinson, y los problemas de cálculo de parámetros celulares que plantea empleando datos obtenidos a partir de un hemocitómetro, y otros protocolos para el contaje de células (en protocol-online)
- arriba -
________________________________________
Material docente diseñado y elaborado por Manuel Reina. Última actualización : . Comentarios : mreina@ub.edu
Se aseptiza el dedo con alcohol y luego se seca al aire o con algodón. Se coge entre el pulgar y el índice y se hace una punción rápida y penetrante a través de la piel de la punta del dedo con una lanceta estéril.
2. Se deshecha la primera gota de sangre y se aspira la siguiente con la pipeta de dilución perfectamente limpia y seca hasta la señal 1 o 0.5 (también puede utilizarse la pipeta de hemoglobina, de 20 microlitros). Hay que evitar la entrada de burbujas de aire, pudiendo ayudarnos de un papel de filtro para conseguir el enrasado.
3. A continuación se toma con la pipeta líquido de Hayem, isotónico con la sangre, hasta la señal 1; así, la sangre queda diluida al 1/10, si tomamos sangre hasta la señal 1, o al 1/20 si tomamos hasta 0.5. Esto es así porque el volumen de la bola de la pipeta es 100 veces superior al del capilar de la misma. (Si hemos utilizado la pipeta de hemoglobina podemos diluir su contenido en 2 o 4 ml de líquido de Hayem para obtener diluciones 1/100 o 1/200).
4. Tomamos la pipeta (o el tubo de ensayo) entre los dedos índice y pulgar y agitamos. A través de la goma de conexión con la pipeta, soplamos para despreciar las primeras gotas por corresponder al líquido que estaba en el capilar.
5. Se adapta un cubreobjetos sobre una cámara cuentaglóbulos limpia y seca y se coloca una gota en uno de los lados del cubre; esta gota penetra por capilaridad y rellena el retículo de la misma.
6. Una vez preparada la cámara se coloca sobre la platina del microscopio dejándose unos minutos en reposo para que sedimenten los glóbulos. Disponemos el condensador bajo y luz débil; enfocamos primero con el objetivo débil seco y luego se cambia al fuerte seco para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo. Finalizado el recuento se procede a la limpieza de la pipeta con acético 1:3, agua destilada y alcohol-éter sucesivamente.
7.El volumen de sangre en el cual se han contado las células resulta de multiplicar la profundidad de la cámara por el factor de dilución, la superficie de los cuadrados y el número de cuadrados contados.
Con cámara de NEUBAUER: Superficie de 1 cuadrado grande (1/20 mm de lado):
Volumen de un cuadrado grande (1/10 mm de profundidad):
Si contamos "a" glóbulos rojos en "n" cuadrados pequeños, el número de glóbulos por cuadrado será a/n.
Si en un volumen 1/4000 mm3 hay a/n glóbulos rojos, en 1 mm3 habrá X. Luego:
siendo X el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre diluida.
Si la sangre se diluyó a 1/100 o 1/200, habrá que multiplicar el valor X por 100 o 200 respectivamente, con lo cual obtendremos un nuevo valor, Y, que representa el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre (sin diluir).
Se utilizan para calcular, mediante el uso del microscopio, el número de partículas (leucocitos, hematíes, bacterias…) por unidad de volumen de un líquido.
La cámara está constituida por una placa base de vidrio especial parecido a un porta, su parte central se encuentra separada de los extremos por unas ranuras. En ella se encuentran las cuadrículas de recuento.
La fórmula de contaje es: partículas/mm3= partículas contadas.
Clases de cámaras:
- Neubauer improved: Es el más utilizado (9 cuadros grandes, cada 1 de 1 mm2.)
- Neubauer: La diferencia es el cuadro grande central.
- Thoma: Se utiliza solo para el recuento de eritrocitos.
- Fuchs-Rosenthal: Se utiliza habitualmente para recuento de células en líquidos orgánicos (LCR, Líquido sinovial…)
Justificación
Es de suma importancia que conozcamos el funcionamiento de la cámara de neubauer ya que la utilizaremos mucho en esta especialidad más adelante en hematología
viernes, 8 de mayo de 2009
pruebas de serologia
Pruebas serológicas
Es un examen del líquido seroso del líquido de la sangre (suero, el líquido transparente que se separa cuando la sangre se coagula) que se utiliza para detectar la presencia de anticuerpos contra un microorganismo.
Las pruebas serológicas son de dos tipos:
•no treponémicas
•Treponémicas.
Las pruebas no-treponémicas incluyen VDRL, RPR, USR y TRUST, de estas las mas usadas son VDRL y RPR. Estas pruebas son utilizadas para despistaje, son económicas y también sirven para evaluar la eficacia del tratamiento.
Las pruebas treponémicas se utilizan para verificar cuando las pruebas no-treponémicas son reactivos o como pruebas confirmatorias cuando el cuadro clínico es sugestivo, pero la serología es negativa.
REACCIONES FEBRILES
Las reacciones febriles (RF) son pruebas serológicas que se han empleado para diagnosticar tifoidea, paratifoidea, ricketsiosis, y brucelosis.
En las reacciones febriles se detectan anticuerpos en el suero del paciente contra: salmonella, Brucella, y Rickettsia.
VDRL
Es un examen de tamizaje para sífilis que mide los anticuerpos llamados reaginas, que pueden ser producidos por el Treponema pallidum, la bacteria causante de dicha enfermedad. Sin embargo, el cuerpo no siempre produce reagina específicamente en respuesta a la bacteria de la sífilis, por lo que el examen no siempre es preciso.
Prueba de embarazo
Es una prueba que mide una hormona llamada gonadotropina corionica humana (GCH), producida durante el embarazo.
Esta hormona aparece en la sangre y en la orina de las mujeres embarazadas hasta 10 días después de la concepción.
jueves, 7 de mayo de 2009
lunes, 23 de marzo de 2009
reporte
OBJETIVO
El objetivo de esta primera práctica era aprender a enfocar el microscopio. Por lo que primeramente colocamos una cámara de Neubauer.
Para enfocar el microscopio estuvimos jugando con las pinzas para la platina y los tornillos macro y micrométrico hasta que conseguimos enfocarlo. Y nos dimos cuenta de que ya estaba enfocado porque podíamos observar unos cuadritos.
Introducción
Para lograr un enfoque del microscopio, primeramente tendremos que manipular las pinzas para la platina, jugar con ellas hasta lograr el enfoque perfecto. Y utilizaremos el objetivo 10x.
También vamos a mover los tornillos macro y micrométrico hasta lograr observar una cuadricula. Muchos pequeños cuadritos perfectos.
Después de eso observaremos una muestra de cebolla y registraremos lo que hemos observado. Repetiremos el mismo con una muestra de tomate y con una muestra de vegetal (hoja) en este caso es repollo.
Al terminar de observar todas las muestras, realizaremos dibujos, bitácoras, y apuntes de nuestras observaciones en las prácticas.
INDICE
1. Objetivo
2. Introducción
3. Marco teórico
* Dibujos
*Notas
*Bitácora
* Recuadro de observaciones personales
4. Conclusión
5. Ficha Bibliográfica
6. Investigación
MARCO TEORICO
Materiales:
1.Microscopio compuesto
2.Cubre y porta objetos
3. Cámara de Neubauer
4.Cebolla
5. Tomate
6. Repollo
Procedimiento:
Se coloca la cámara de Neubauer en la platina y se comienza a mover las pinzas para la platina y los tornillos macro y micrométrico hasta conseguir un perfecto enfoque.
Repetir procedimiento con la muestra de cebolla, tomate y repollo.
Mis observaciones
Cámara de Neubauer
Al tener el perfecto enfoque lo que observe fueron muchos pequeños y perfectos cuadritos. Tales como en una lámina cuadriculada.
Muestra de cebolla
Lo que observe con la cebolla una vez enfocado el microscopio, se veían muchos círculos deformes como gelatinosos y color transparente, uno encimado del otro.
Muestra de tomate
Lo que pude observar aquí, fue como la figura de una estrella, un poco deforme de color rojo bajito.
Muestra de repollo
Al colocar la muestra de repollo sobre el porta y cubreobjetos y tenerlo bien enfocado pude observar que parecía como gel, de color verde bajito y se podía observar como una veredita en medio.
BITACORA
Actividad Tiempo
Colocar equipo de bioseguridad 15 minutos
Enfoque grupal del microscopio 30 minutos
Enfoque por Vanessa 3 minutos
Enfoque por Carolina 3 minutos
Enfoque por Cristian 6 minutos
Enfoque por Jessica 5 minutos
Observación de cebolla 3 minutos
“ Tomate 5 minutos
Observaciones de repollo 2 minutos
Muestra Observación personal
Cebolla Lucía como si fueran cúmulos de gel, color transparente, eran muchos y eran como circulares, otros ovalados, aunque algo deformes.
tomate El tomate fue diferente, parecía una estrellita o solecito, color rojo bajito.
repollo El repollo al observarlo note que contiene muchas mas células pues todo lucia más junto, era como gelatinoso y color verde.
CONCLUSION
En esta primera práctica aprendimos a enfocar el microscopio compuesto, moviendo las pinzas para la platina al igual que los tornillos macro y micrométrico hasta obtener un perfecto enfoque.
Como parte de la práctica observemos muestras de vegetales: Cebollas, tomate y repollo.
Fue muy interesante ver como esta constituido, ya que es algo que el ojo humano por si solo no puede captar.
Sin duda este era el primer paso para poder realizar las siguientes prácticas.
FICHA BIBLIOGRAFICA
1. Apuntes del laboratorio de Química
2. Observaciones personales de la práctica # 1
3. www.wikipedia.com
INVESTIGACION
Células presentes en el tomate
Los cromoplastos son un tipo de plastos, orgánulos, propios de la célula vegetal, que almacenan los pigmentos a los que se deben los colores, anaranjados o rojos, de flores, raíces o frutos:
Cuando son rojos se denominan rodoplastos.
Es cromoplasto según su estructura:
Cristalosos: los pigmentos se depositan como cristaloides asociados con las membranas tilacoides, tomate, zanahoria.
Células presentes en el repollo
Los cloroplastos son orgánulos celulares que en los organismos eucariontes fotosintetizadores se ocupan de la fotosíntesis. Específicamente se usan para designar a los plastos verdes, algas verdes o plantas.
Células que contiene la cebolla
El bulbo de la cebolla esta compuesto por células que tienen un tamaño relativamente grande y poseen formas alargadas u ovaladas.
Función de la cámara de Neubauer
La cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en cultivo celular para realizar conteo de células en un medio de cultivo, líquido.
Consta de dos placas de vidrio, entre las cuales se puede alojar un volumen conocido de liquido.
moleculas inorganicas
AGUA: es la mlecual inorganiza mas abundante tanto en la naturaleza como en la matteria viva.
MOLECULA DE AGUA: consta de dos atomos de hidrogeno unidos a un atomo de oxigeno mediante enlaces covalentes polares .
PUENTES DE HIDROGENO: es la atraccion electrostatica reciproca entre el nuclelo del hidreogeno , parcialmente positivo.
PREPIEDADES FICICAS Y QUIMICAS DEL AGUA: el papel biologico del agua depende de ciertas propiedades ficicas y quimicas nottables como:
-- ELEBADO CALOR ESPECIFICO
-- ELEVADO PUNTO DE EBULLICION
-- ELEVADA CONSTANTE DIELECTRICA
Distribucion coorporal : el agua presenta en un adullto el 60% del peso corporal
